氧化磷酸化系列_線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ

測定方法：微量法

產品規格：100管/96樣

注   意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD還原為FADH2，后者進一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。

氧化磷酸化系列_線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ

測定原理：

復合體Ⅱ的催化產物還原型輔酶Q可進一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：液體20mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體1.5mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑六：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅱ（此步可選做）。

5、步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅱ酶活性測定。