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酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)測試盒_微量法

  • 更新時間:  2022-07-26
  • 產品型號:  100管/96樣
  • 簡單描述
  • 酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)測試盒_微量法由上海紀寧生物公司提供,包括CarE檢測試劑盒說明書,免費代測,規格,包裝,品牌等關于有關本司測試盒所有產品的詳細介紹
詳細介紹

酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)測試盒_微量法

測定方法:微量法

產品規格:100管/96樣

注   意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于Ser水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)測試盒_微量法

測定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固籃顯色;在450 nm光吸收增加速率,計算CarE活性。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體15mL×2瓶, 4℃保存;

試劑三:粉劑×2支, 4℃保存,臨用前取1支試劑三,加0.6ml無水乙醇充分溶解;

試劑四:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前取1支試劑四,加少量試劑二溶解;

工作液配制:臨用前配制,向1瓶試劑二中,加入溶解后的試劑三和試劑四各1支,充分溶解,過濾,4℃避光保存,可用1周。

粗酶液提?。?/p>

細菌、細胞樣品制備

收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);12000g 4℃離心30min,取上清液待測。

2、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿;12000g 4℃離心30min,取上清液待測。

3、液體:直接測定

測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到450 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL蒸餾水和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2?!鰽空白管=A2-A1

4. 測定管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL上清液和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4?!鰽測定管=A4-A3

注意:空白管只需測定一次。

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