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堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_酯酶系列_分光法

  • 更新時間:  2022-07-26
  • 產品型號:  50管/24樣
  • 簡單描述
  • 堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_酯酶系列_分光法由上海紀寧生物公司提供,包括AKP/ALP檢測試劑盒說明書,免費代測,規格,包裝,品牌等關于有關本司測試盒所有產品的詳細介紹
詳細介紹

堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_酯酶系列_分光法

測定方法:分光光度法

產品規格:50管/24樣

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

堿性磷酸酶AKP/ALP測試盒_酯酶系列_分光法

測定原理:

在堿性環境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基和鐵KCN 反應紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510 nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。

自備儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。

標準品:液體×1支(EP管中),2 μ mol/mL酚標準液,4℃保存。

粗酶液提?。?br/>

1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,4℃、8000g離心10min,取上清液待測。

2.細菌或細胞:按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.血液可直接測定,或者適當稀釋后測定。


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測定步驟:

1. 分光光度計預熱30min,調節波長到510 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。

3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸餾水,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A空白管。

4. 標準管:取EP管,加入20μL標準品,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A標準管。

5.對照管:取EP管,加入20μL上清液,200μL蒸餾水,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A測定管。

6. 測定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL試劑二,200μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四600μL,混勻后于510 nm測定吸光度,記為A測定管。

注意:空白管和標準管只需測定一次。每個測定管設一個對照管。


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