谷胱系列(GSH)還原酶(GR)測試盒_微量法

測定方法：微量法

產品規格：100管/96樣

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，是(GSH)氧化還原循環的關鍵酶之一（通常昆蟲中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH，有助于維持體內GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用，此外GR還參與抗壞血酸－(GSH)循環途徑。

谷胱系列(GSH)還原酶(GR)測試盒_微量法

測定原理：

GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時NADPH脫氫生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長無吸收峰；通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率，從而計算GR活性。

自備儀器和用品：

低溫離心機、水浴鍋、移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水

試劑組成和配置：

試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×2支，-20℃保存。臨用前加入1.2mL蒸餾水，混勻。

試劑三：粉劑×2支，-20℃保存。臨用前加入0.6mL蒸餾水，混勻。

粗酶液提?。?br/>

1.組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。

2.細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測。

3.血清等液體：直接測定。

操作步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑一置于25℃（普通物質）或者37℃（哺乳動物）中預熱30min。

3. 測定管：取微量石英比色皿或96孔板，依次加入10μL試劑三，20μL試劑二，150μL試劑一，20μL上清液，混勻，于340nm迅速測定初始吸光度和180 s吸光度，記為A測1和A測2，△A測定管= A測1﹣A測2。